PWS GFP als tracker in tumorcellen
-
Hallo,
Mijn pws gaat over een gfp eiwit die als tracker dient in een tumorcel. Nu heb ik een onderzoekje gedaan naar gfp in plasmiden in bacteriën wat werkte. Nu had ik een paar vragen voor eukaryotische cellen:
- kunnen plasmiden in specifieke eukaryotische cellen (en met nadruk op menselijke cellen) worden ingebracht, die dan ook werkzaam zijn en blijven?
- delen deze plasmiden dan ook mee met de celdeling?
- als een gfp gen d.m.v. de crispr-cas9 methode in het dna wordt ingevracht van een menselijke cel, moet het gemodificeerde cas9 eiwit samen met het gen voor de aanmaak van gfp dan heel precies in de celkern worden gebracht?
- of kan een cas9 eiwit samen met een gfp gen 'gewoon' in een cel worden gespoten en vind het zelf zijn weg naar het DNA?
- tot hoe ver kan Uv licht door het menselijk lichaam dringen?
- tot hoever zou, wanneer een cel gfp kan uitscheiden in het lichaam, dit kunnen doordringen dat kan worden gezien op het blote oog wanneer uv licht op het lichaam wordt geschenen?
Alvast bedankt!
Mvg,
Nikita Catsburg
-
@Nikitacatsburg
Hallo Nikita,Ik zou even voor je kijken of ik wat antwoorden of wetenschappelijke artikelen voor je kan vinden. Had je zelf al gekeken via Google scholar of hier wat te vinden was over deze specifieke vragen?
Zelf ga ik daar namelijk eerst even kijken, maar als we daar allebei niets kunnen vinden dan zou ik even op de universiteit moeten rondvragen. Het is nu alleen wel een vakantie week hier dus het kan even duren voordat ik daar antwoord heb.
Met vriendelijke groeten,
Sanne -
@Nikitacatsburg
Hallo Nikita,Zelf ben ik niet heel veel vooruit gekomen met het uitzoeken via literatuur omdat het redelijk specifiek is. Ik zal deze week even gaan rondvragen voor je op de universiteit.
Groetjes,
Sanne -
@Nikitacatsburg
Ha Nikita,Sanne is op dit moment op vakantie! Maar ze zal hierna (komende week) terugkomen op je vraag.
Groetjes,
Thom
-
@Nikitacatsburg
Hallo Nikita,Het is me gelukt om je vragen te stellen aan iemand op de universiteit die veel van dit vak gebied af weet. Hieronder staan zijn antwoorden op je vragen. Verder raadde hij het volgende artikel aan over de basis van de crispr-cas9 methode.
Graag wil ik nog benadrukken dat het gebruik van de crispr-cas9 methode op menselijke cellen momenteel een groot ethieke kwestie is. Zeker als je kijkt naar wat er in china is gebeurt met de eerste GM baby. Dit is zeker iets wat je in je profielwerkstuk kunt meenemen om het belang hiervan te laten zien.
• kunnen plasmiden in specifieke eukaryotische cellen (en met nadruk op menselijke cellen) worden ingebracht, die dan ook werkzaam zijn en blijven?
Er zijn plasmides die ook in eukaryotische cellen kunnen delen en voor gen expressie gebruikt kunnen worden. Deze gebruiken wel andere replicatie mechanismen dan bacteriele plasmide.• delen deze plasmiden dan ook mee met de celdeling?
Ja• als een gfp gen d.m.v. de crispr-cas9 methode in het dna wordt ingevracht van een menselijke cel, moet het gemodificeerde cas9 eiwit samen met het gen voor de aanmaak van gfp dan heel precies in de celkern worden gebracht?
Voor de duidelijkheid: het gen wordt vaak ingebracht in het genoom van de cel (dus in de chromosomen), niet in een plasmide. Daarvoor moet het Cas9 eiwit, een gidsRNA en het integratie fragment aanwezig zijn in de cel. Cas9 kan daarbij als DNA toegevoegd worden (als plasmide, of in het genoom) of tegelijkertijd met de andere onderdelen als eiwit. Welke methode het beste werkt is onder andere van het type cel en van het type modificatie afhankelijk.• of kan een cas9 eiwit samen met een gfp gen 'gewoon' in een cel worden gespoten en vind het zelf zijn weg naar het DNA?
In theorie kan dat maar het is niet heel makkelijk. Vaak is de “transformatie” (dus de injectie) niet triviaal.• tot hoe ver kan Uv licht door het menselijk lichaam dringen?
Waarvoor wil je dit precies weten? UV licht is namelijk niet nodig voor het gebruik van GFP. In princiepe volstaat licht van een laser met een golflengte van 488 nm, die dus minder energie-dragend is en daarom dieper het menselijk lichaam binnendringt. Je kan GFP op zich wel exciteren met UV, maar dat is niet erg efficient en UV bestraling is gevaarlijk voor de menselijke huid (met name vergroot het de kans op DNA schade en dus op kanker).• tot hoever zou, wanneer een cel gfp kan uitscheiden in het lichaam, dit kunnen doordringen dat kan worden gezien op het blote oog wanneer uv licht op het lichaam wordt geschenen?
Ten eerste wordt GFP niet vanzelf door cellen uitgescheiden, het blijft in princiepe in de cel zelf. Je kan het wel laten secreteren, maar daar moet je dan extra voorzieningen voor treffen, zoals een zogenaamde export tag. Verder is GFP met het blote oog niet goed zichtbaar. In heel extreme gevallen kan je het wel zien, zoals als je ‘fluorescent gfp rabbit’ googled, maar dat is alleen in het donker en met zeer efficiente expressie van GFP. Als je de expressie van GFP op cellulaire schaal wil zien kan dat wel goed, met name door een fluorescentie microscoop of flow cytometer te gebruiken.Hopelijk heeft dit je vragen over dit onderwerp beantwoord.
Met vriendelijke groeten,
Sanne -
Beste Sanne,
Aan deze antwoorden heb ik zeker ontzettend veel gehad. Deze informatie kon ik gewoonweg niet vinden toen ik op zoek ging naar literatuur, dus ontzettend bedankt voor het beantwoorden van mijn vragen!
Mocht je nieuwsgierig zijn: Als eindcijfer voor mijn gehele profielwerkstuk heb ik een 9,1 :)
Heel erg bedankt!!!
Groetjes,
Nikita Catsburg
-
@Nikitacatsburg
Gefeliciteerd Nikita!! Fijn dat we konden helpen
